Servicio de Microscopía Crioelectrónica
La microscopía electrónica criogénica (crio-EM) es una técnica de vanguardia en biología estructural que permite a los científicos visualizar los detalles precisos de las macromoléculas biológicas. La crio-EM se basa en microscopía electrónica de transmisión a resolución cercana a la atómica. Creciente demanda de mercado en numerosas aplicaciones biomédicas, por ejemplo, desarrollo de fármacos, anticuerpos, vacunas, etc.
Ventajas de la crio-EM frente a la cristalografía de rayos X
Aunque la difracción de rayos X aún puede alcanzar una resolución ligeramente mayor, la crio-EM presenta ventajas significativas:
- Se necesita una cantidad mínima de muestra.
- No hace falta cristalización.
- No hace falta una fuente sincrotrón de rayos X.
- Preservación del estado casi nativo.
- Evaluación de la flexibilidad.
- Adecuado para partículas difíciles de cristalizar, como proteínas de membrana o ensamblajes supramoleculares (por ejemplo, virus).
- La heterogeneidad de las conformaciones puede resolverse en un solo ejemplar.
- Bajo nivel de pureza aceptado.
Crecimiento exponencial del número de entradas en EMDB:
Soluciones estructurales
- Evaluación de idoneidad de muestra – Mancha negativa
Antes de dedicar recursos importantes al microscopio en crio-EM, el examen de tinción negativa generalmente se realiza a temperatura ambiente y bajo voltaje. Este paso permite evaluar la idoneidad de la muestra, incluyendo homogeneidad, agregación, morfología de partículas, tamaño y distribución, utilizando un agente de tinción de alta densidad electrónica.
La tinción negativa sirve como un paso crítico de control de calidad para evaluar si una muestra es adecuada para la adquisición posterior de datos crio-EM.
- Determinación de estructura de alta resolución – Análisis de partícula única (SPA)
La adquisición de datos crio-EM suele generar aproximadamente entre 10⁴ y 10⁶ proyecciones bidimensionales individuales de partículas capturadas en diversas orientaciones. Estas proyecciones se alinean y clasifican computacionalmente mediante un flujo de trabajo de procesamiento de imágenes para reconstruir un mapa de densidad tridimensional con resolución subnanométrica o casi atómica.
Posteriormente se construye, refina y valida un modelo atómico dentro del mapa de densidad reconstruido, proporcionando información estructural sobre los mecanismos funcionales de la macromolécula biológica de interés.
- Análisis Estructural In Situ – Tomografía Crioelectrónica (Crio-ET)
La criotomografía electrónica permite la visualización tridimensional de estructuras biológicas en su contexto celular o viral nativo. Este enfoque es especialmente adecuado para estudiar grandes conjuntos macromoleculares, complejos asociados a membranas y mecanismos de infección viral, ofreciendo información espacial y organizativa inaccesible por métodos de partícula única.
Flujo de trabajo de servicio
Consulta de proyectos → firma de → acuerdo de servicio → confirmación de muestra recibida → inspección de calidad → cribado negativo de manchas → recogida de datos crio-EM → procesamiento → entrega de informes.
Entregables de Datos y Resultados
Se proporciona disponibilidad completa de datos a lo largo de todo el ciclo de vida del proyecto. Los materiales entregados incluyen películas crio-EM en bruto con archivos de referencia de ganancia, archivos de datos intermedios en varias etapas del procesamiento de datos, mapas finales de densidad tridimensional con métricas de resolución y calidad, modelos de coordenadas atómicas cuando correspondan e informes de validación cruzada como evaluaciones MolProbity.
Todos los datos pueden entregarse a través de dispositivos de almacenamiento portátiles o plataformas seguras basadas en la nube.
Tres equipos principales
Nuestros servicios crio-EM se apoyan con acceso a plataformas de investigación científica de alta gama equipadas con instrumentación de última generación.
Los sistemas disponibles incluyen Talos L120C G2, una plataforma de microscopía electrónica de transmisión y crio-crio-electro de nivel básico; Glacios 2, un sistema criogénico de 200 kV optimizado para flujos de trabajo rutinarios de partícula única y tomografía; y Titan Krios G4, una plataforma crio-EM insignia de 300 kV diseñada para maximizar la estabilidad, automatización, rendimiento y potencial de resolución.
Estas plataformas apoyan colectivamente el cribajido con rejillas, el análisis de partículas individuales, la criotomografía electrónica y el desarrollo avanzado de métodos en una amplia gama de aplicaciones de biología estructural.
¿Por qué Longlight?
Ofrecemos una valiosa y madura experiencia en criomicroscopía electrónica mediante el acceso a plataformas de investigación científica de alto nivel y la colaboración con expertos del sector y asesores científicos académicos. Nuestros servicios enfatizan la total transparencia y completitud en la entrega de datos, cubriendo datos en bruto, archivos de procesamiento intermedio, mapas de densidad final, modelos atómicos e informes de validación.
Combinando instrumentación avanzada, flujos de trabajo experimentados en procesamiento de datos y plazos de entrega equilibrados, ofrecemos soluciones estructurales crio-EM fiables y de alta calidad, adaptadas a diversas necesidades de investigación.
Preguntas frecuentes.
P1: ¿Cuánta muestra necesitan preparar los clientes?
- Tinte negativo:
concentración mínima ~1 g/L
volumen mínimo ~100 μL.
- SPA con proteínas solubles:
concentración mínima ~1 g/L
volumen mínimo ~100μL.
- SPA con proteínas de membrana:
concentración mínima ~1 g/L
volumen mínimo ~100μL.
para ser discutido y ajustado si fuera necesario
P2: ¿Cuáles son los requisitos para el buffer de muestras?
- Rango de pH: 6,0-8,5
- concentración de sal <200 mM
- Gluccerol bajo (¿cuánto? DOI: 10.1107/S2053230X24002553)
- Azida baja (¿cuánto? falta referencia de apoyo)
P3: ¿Cuál es un proceso típico de servicio?
Consulta de proyectos → firma de → acuerdo de servicio, confirmación → muestra de → inspección de calidad → mancha negativa → recogida de datos → procesamiento de datos → entrega de informes.
P4: ¿Cuál es el tiempo medio de entrega?
- Tinción negativa: 1-2 semanas.
- SPA, resultados preliminares: 6-8 semanas.
- SPA, modelo de alta resolución: 2-3 meses.
ChIP-seq
ChIP estudia la interacción entre el ADN y las proteínas, y ChIP-seq se combina con la secuenciación de próxima generación para detectar sitios de ADN en el genoma que se unen a factores de transcripción/histonas específicos, que se utiliza para estudiar la interacción entre las proteínas y la cromatina.
Genómica
Longlight se ha centrado en el diagnóstico molecular y la biología molecular, hemos lanzado algunos instrumentos relacionados con NGS y consumibles de reactivos, principalmente ultrasonidos enfocados, nos hemos comprometido a promover el desarrollo de la genómica, para servir mejor a la causa médica humana.
Consumibles y kits
Longlight proporciona diferentes tipos de gel de agarosa prefabricado, eliminador de ácidos nucleicos, tubo Qubit, kits de extracción de ácidos nucleicos y kits de preparación de bibliotecas. Mientras tanto, todos estos productos pueden ser ampliamente utilizados en investigación científica básica, biofarmacéuticos y otros escenarios de aplicación.
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