¿Cómo reducir el tiempo de electroforesis de ácido nucleico a 10 minutos?

La electroforesis de ácidos nucleicos suele ser más lenta de lo necesario, lo que roba tiempo, sobrecalienta los geles y retrasa las decisiones en laboratorios ocupados.

El dolor: por qué los geles tardan demasiado

La mayoría de los equipos aceptan carreras de 30 a 60 minutos como "normales". Pero las tiradas largas ocultan costos reales. El calor se acumula, las bandas se difuminan y se pierde tiempo entre la PCR y el siguiente paso. Los búferes TAE / TBE clásicos no fueron diseñados para velocidades a intensidades de campo más altas. Empuje el voltaje y el gel se calienta; Si se presiona más tiempo, se corre el riesgo de una migración distorsionada o de una recuperación deficiente. Volver a ejecutar un gel para arreglar las manchas cuesta más de minutos: reduce la confianza y obstruye su flujo de trabajo.

De las conversaciones con los clientes, escuchamos los mismos puntos débiles una y otra vez. Los investigadores quieren controles más rápidos de los productos de PCR, pruebas de alto rendimiento que no se detengan y bandas limpias que puedan ir directamente a la ligadura o la recuperación del gel. El departamento de adquisiciones quiere consumibles que duren y no requieran un reemplazo constante. En Longlight Technology, hicimos una pregunta simple: ¿qué pasaría si la electroforesis de ácido nucleico pudiera terminarse de manera confiable en 5 a 10 minutos sin sacrificar el rendimiento posterior?

❓ ¿Qué nos dicen los laboratorios?

El sobrecalentamiento, la fuerza de amortiguación inconsistente entre el lanzamiento y la carrera, y la ansiedad por los pasos aguas abajo limitan la velocidad. Los equipos dudan en cambiar los tampones porque les preocupa la ligadura, el rendimiento de la extracción o la estabilidad del ARN. No deberías tener que elegir entre velocidad y calidad.

(FiguCon respecto a 1. Aplicación de tampón de funcionamiento súper rápido en gel de agarosa al 0,8%. Carril 1: D12000

escalera (5 μL); Carril 2: 4 μL; Carril 3: 3 μL; Carril 4: 2 μL; Carril 5: 1 μL)

(Figura 2. Aplicación de búfer de ejecución súper rápida en

Gel de agarosa al 1%. Carril 1: escalera D5000 (5 μL); Carril 2: 4 μL; Carril 3: 3 μL; Carril 4: 2 μL; Carril 5: 1 μL)

(Figura 3. Aplicación de búfer de ejecución súper rápida en

Gel de agarosa al 2%. Carril 1: escalera D1000 (5 μL); Carril 2: 4 μL; Carril 3: 3 μL; Carril 4: 2 μL; Carril 5: 1 μL.)

• Super Fast Running Buffer es totalmente compatible con varias concentraciones de geles de agarosa (0,8%, 1%, 2%), como se muestra en la Figura 1–3. Independientemente de la concentración de gel, las bandas de ácido nucleico mantienen una excelente resolución y claridad, lo que garantiza las necesidades experimentales para separar moléculas de ADN de diferentes tamaños.

La solución: explicación del búfer de ejecución súper rápida

Nuestro 50x Búfer de funcionamiento súper rápido es una formulación de baja concentración de iones construida específicamente para la electroforesis de ácido nucleico de agarosa. Menos carga iónica significa menos calor en un campo determinado. Combínalo con la concentración adecuada de agarosa y podrás operar con confianza hasta 25 – 30 V/cm, comprimiendo una carrera que a menudo toma 30 minutos en solo 5 – 10 minutos. En el uso cara a cara, los equipos suelen ver separaciones de ~2,5 a 3 veces más rápidas que 1x TAE estándar o 1x TBE.

Cómo funciona

La menor fuerza de iones reduce el calentamiento de Joule y ayuda a mantener bandas afiladas a un voltaje más alto. Esa estabilidad térmica preserva la resolución del ADN y el ARN al tiempo que permite la velocidad. Igual de importante, la química es fácil de usar: no interfiere con la extracción o ligadura del gel de ADN, por lo que puede pasar directamente a la clonación, la limpieza o la cantidad.

• Respuesta rápida: 5 – 10 minutos a 25 – 30 V/cm

• Bandas afiladas: alta resolución incluso con altas intensidades de campo

• Compatibilidad posterior: sin impacto en la recuperación o ligadura del gel

• Mayor recuperación: Con frecuencia supera el rendimiento de recuperación TAE/TBE

• Capacidad de búfer reutilizable: almacenamiento intermedio fuerte para múltiples usos

• Configuración rápida

Diluya el tampón 1:50 para preparar una solución de trabajo 1x (por ejemplo, 20 ml de 50x en 980 ml de agua destilada). Guarde el 1x a temperatura ambiente. Para obtener la mejor consistencia, use el mismo lote de 1x para lanzar y ejecutar el gel; La mezcla de diferentes lotes puede alterar la fuerza del tampón en la interfaz del gel. No diluir por debajo de 1x, lo que invita a una migración anormal.

Condiciones de funcionamiento

Funciona a 25 – 30 V/cm de longitud de gel y ajústalo en función de la geometría y el comportamiento térmico de tu tanque. Al igual que con cualquier carrera de campo alto, confirme sus límites de suministro de energía; Si la corriente o el voltaje disminuyen, verifique si el instrumento está limitando la corriente o la energía. La tinción es flexible: agregue tinte al gel o tinte después de la ejecución, ambos funcionan.

• Seguridad y estabilidad

Los ciclos continuos o las altas temperaturas ambiente pueden elevar la temperatura del amortiguador. Si es necesario, enfríe la unidad o colóquela sobre hielo para proteger la resolución. Reemplace el búfer periódicamente para mantener la precisión. Almacene 50 veces el stock y 1 solución de trabajo a temperatura ambiente; En las condiciones recomendadas, la estabilidad es de al menos 12 meses desde la recepción. Como siempre, use una bata de laboratorio y guantes desechables. Este producto está destinado a la investigación por parte de profesionales.

Ganancias en el mundo real y cómo empezar

Cuando la velocidad es confiable, todo lo que hay que hacer aguas abajo mejora. Un gel de 5 a 10 minutos le permite verificar la PCR, ajustar la preparación de una biblioteca o validar una ligadura sin descarrilar el día. Para grupos de alto rendimiento, los geles más rápidos desobstruyen las colas y aumentan el rendimiento. Eso significa más datos antes del almuerzo y menos repeticiones nocturnas.

En Longlight Technology, construimos este búfer para ayudar a los equipos a acortar el ciclo entre la hipótesis y el resultado. En implementaciones piloto, los laboratorios informaron bandas más limpias en campos más altos, transferencias más suaves a la ligadura y un mejor rendimiento de extracción de gel en comparación con los tampones heredados. La reutilización y el formato concentrado de 50x también respaldan el control de costos: una botella rinde mucho y la fuerte capacidad de almacenamiento intermedio significa menos intercambios en medio de una tirada.

Mejores prácticas para la electroforesis rápida de ácidos nucleicos

• Moldee y ejecute con el mismo lote 1x para obtener consistencia.

• Comience con 25 V / cm, luego avance hacia 30 V / cm según lo permita su configuración.

• Observe la temperatura del búfer en secuencias más largas de ejecuciones; Deje enfriar según sea necesario.

• Mantenga el voltaje por debajo de 200 V si deja caer un gel de fundición TAE/TBE en el tampón rápido; Los voltajes muy altos pueden distorsionar los resultados en ese escenario.

• Donde brilla

Ejecuciones de verificación cortas, comprobaciones rápidas durante la clonación, detección de docenas de amplicones de PCR y aceleración de los flujos de trabajo de ARN que normalmente se arrastran bajo los sistemas tradicionales. Si su equipo pasa más tiempo esperando geles que actuando sobre los resultados, la ganancia es inmediata.

Pensamientos de Fina

¿Listo para reducir su tiempo de electroforesis de ácidos nucleicos a 10 minutos, sin renunciar a la claridad o la recuperación? Hable con Longlight Technology hoy mismo para solicitar una muestra, obtener una plantilla de POE o revisar la compatibilidad de su caja de gel. Convirtamos las carreras de gel de los cuellos de botella en un punto de control rápido y mantengamos sus experimentos en movimiento.