Seleccionar el sistema de imagen en gel UV adecuado para obtener resultados claros y reproducibles

Si las bandas son débiles, el fondo es alto o las imágenes están mal expuestas, incluso una ejecución exitosa de electroforesis puede ser difícil de interpretar. La calidad de la imagen es un factor crítico para la verificación de resultados, la recuperación de la muestra, la notificación y para experimentos con resultados reproducibles en laboratorios que realizan geles de ADN, ARN o proteínas.

Un Sistema de Imagen con Gel UV está compuesto por los siguientes componentes: iluminación controlada, armario hermético, filtros ópticos, cámara sensible y software de análisis. Por tanto, no basta con comparar la resolución de la cámara a la hora de decidir qué sistema elegir. El comprador debe tener en cuenta todo el proceso de imagen, desde la excitación de tintes hasta la exportación de los datos.

Entonces, ¿qué es un gel UV? Imaging ¿Sistema?

Un sistema de imagen por gel UV está diseñado para la visualización y documentación de ADN, ARN o bandas proteicas tras la electroforesis en gel. Combinando iluminación UV, una cámara de alta sensibilidad, filtros ópticos y software de análisis de imágenes, el sistema permite a los usuarios capturar claramente imágenes en gel y analizar la posición, brillo y tamaño molecular de bandas. Se utiliza comúnmente en verificación por PCR, electroforesis de ácidos nucleicos, análisis de digestión por restricción y experimentos rutinarios de biología molecular.

Un sistema de imagen cerrado permitirá captura, análisis, etiquetado, almacenamiento y exportación controlados, algo que no es posible con una simple caja de visualización UV. El Sistema de Imagen en Gel (GI-200) de Longlight combina todas estas características en un solo sistema de imagen de mesa para la imagen diaria de laboratorio.

Por qué importa la compatibilidad entre iluminación y tinte son importantes

Una buena fuente de UV no es necesariamente la mejor para obtener una buena imagen. La longitud de onda de excitación debe corresponder a la tinción seleccionada y debe haber un filtro óptico que pase la fluorescencia emitida. Esta desadaptación puede resultar en bandas tenues, grandes diferencias de fondo o falsas diferencias entre líneas.

La luz UV de 302 nm se utiliza comúnmente para muchas tinciones convencionales de ácidos nucleicos, mientras que otras longitudes de onda o luz azul pueden ser preferibles dependiendo del tinte y la aplicación posterior. Es importante que los laboratorios confirmen la compatibilidad de la tinción y no utilicen una sola longitud de onda para cada ensayo. La guía Longlight para elegir un transiluminador UV te informa sobre la longitud de onda, la uniformidad de la iluminación y el área de visualización, y cómo afectan a los resultados.

Evalúa la cámara como una Completo Cadena de imagen

Los megapíxeles se utilizan para indicar dimensiones de imagen, pero no son indicadores de rendimiento por sí solos. La capacidad de grabar bandas tenues y fuertes en la misma imagen depende de la sensibilidad del sensor y la relación señal-ruido, junto con la calidad del objetivo y la elección de filtros, el rango dinámico y la uniformidad de la iluminación.

Si se realizan pruebas PCR rutinarias, la separación clara de bandas podría ser adecuada. Para muestras con baja abundancia y comparaciones semicuantitativas, se requiere menor ruido y mayor rango dinámico. Los usuarios deberían pedir ver imágenes tomadas por el usuario con su tipo de gel y tinte en lugar de depender de una hoja de resolución.

Protección del ADN durante Imagen y excisión de gel

Los ácidos nucleicos pueden dañarse por la exposición a los rayos UV, especialmente si el gel sigue expuesto a los rayos UV durante el proceso de corte de las bandas. Esto puede disminuir la eficiencia de la clonación o afectar a aplicaciones sensibles aguas abajo. Por lo tanto, las exposiciones deben minimizarse.

La flexibilidad de laboratorio la proporciona un sistema que ofrece dos modos: UV y luz azul. La UV es adecuada para tinciones conocidas y para la documentación regular, pero la luz azul puede ser preferible cuando se recupera ADN del gel, siempre que se utilice una tinción de ácidos nucleicos compatible con luz azul. Para más detalles, véase Longlight's Guía de imagen en gel de alta resolución y escisión de gel segura contra UV.

Haz que la seguridad UV sea un requisito de compra

Los ojos y la piel pueden dañarse por la radiación UV directa o reflejada. Un armario de imagen cerrado con paneles bloqueadores de UV y enclavamientos de puertas puede reducir la exposición accidental a la radiación UV.

Los procedimientos de laboratorio no sustituyen las características de seguridad. Sin embargo, se requieren equipos de protección personal adecuados, formación, señales de advertencia y prácticas operativas documentadas para los usuarios. Pero un recinto bien diseñado facilitará el comportamiento correcto y reducirá la exposición durante la toma de imágenes rutinaria.

El sistema coincide con el Laboratorio Flujo de trabajo

Los laboratorios deben establecer el resultado deseado de la imagen resultante antes de realizar una compra. Quizá el laboratorio docente necesite ver los resultados rápidamente, o quizá el laboratorio regulado o de investigación quiera configuraciones de adquisición repetibles, registros de usuario, anotaciones y archivos buscables.

Los beneficios del flujo de trabajo incluyen exposición automática, enfoque automático, detección de escalera, optimización de imágenes, nombres automáticos de archivos, transferencia de datos y registros de auditoría. Considera Imagen por electroforesis con múltiples fuentes de luz para el laboratorio de ensayos múltiples, que también puede reducir la necesidad de instrumentos separados.

Prueba con el real ¡Muestras!

Una demostración debe incluir no solo un gel "de laboratorio", sino también simular condiciones "normales". Prueba bandas débiles y fuertes lado a lado, compara las mismas bandas de muestra en diferentes partes del escenario y compara la configuración automática con una configuración manual validada.

Comprueba si el sistema detecta bandas tenues sin saturar las fuertes. Considera también la uniformidad de fondo, la consistencia del enfoque, la precisión de las anotaciones, la velocidad de exportación y la facilidad de limpieza. Estas pruebas deberían mostrar el rendimiento real mejor que las cámaras de hoja técnica.

Estandarizar Imaging Tras la instalación

Incluso el sistema más competente variará de un usuario a otro si los usuarios alteran las manchas, exposiciones, filtros y cualquier otro manejo de archivos sin documentarlo. Los laboratorios deberían desarrollar técnicas de imagen específicas para cada aplicación y guardar los ajustes validados, si los proporciona el software.

Se recomiendan las siguientes comprobaciones rutinarias: Superficie de imagen, salida de iluminación, enfoque, filtros, capacidad de almacenamiento y bloqueo de seguridad. También es útil registrar las fechas de mantenimiento, ya que esto puede ayudar a diferenciar la deriva del instrumento de los cambios de tinción o preparación de la muestra.

Si ya lo has hecho tener Un sistema, ¿cuáles son las señales de que es hora de comprar uno nuevo?

La sustitución puede justificarse si se pasan por alto bandas tenues de forma constante, hay una iluminación desigual, no se pueden replicar los ajustes de exposición y/o faltan archivos de imagen para facilitar la revisión. Las necesidades de mantenimiento continuas y el hecho de que las plataformas antiguas pueden no ser tan resistentes a las manchas como las más nuevas también pueden sumar el coste total de tener una plataforma más antigua.

Se deben tomar la decisión con experimentos repetidos, el tiempo del operador, las limitaciones de seguridad y las necesidades de gestión de datos, NO solo la antigüedad del equipo. Los laboratorios que consideran una actualización pueden llamar a Longlight para discutir sus muestras, tinciones, formatos de gel y requisitos de documentación.

Conclusión

La cámara de mayor resolución no es necesariamente el mejor sistema de imagen con gel UV. Es el sistema que empareja la luz con la química de las tinciones, evita la saturación de bandas, protege al usuario y a las muestras y deja registros consistentes.

Los laboratorios pueden utilizar una demostración basada en muestras o una revisión de especificaciones que se centre en el flujo de trabajo para elegir una plataforma que proporcione resultados fiables entre operadores y experimentos.

Preguntas frecuentes

Q1. ¿Cuál es el propósito de un sistema de imagen con gel UV?

Captura ADN, ARN o geles de proteínas teñidos tras la electroforesis. Las imágenes creadas se analizan, documentan, comparan y exportan.

Q2. ¿Tiene sentido usar imágenes UV para recuperar el ADN?

Podría usarse, pero debería haber un esfuerzo por minimizar la exposición, ya que los rayos UV pueden dañar el ADN. Para excisiones en gel y clonación posterior, a menudo es preferible hacer imágenes con luz azul usando un tinte compatible.

Q3. ¿Por qué en la imagen capturada las bandas de gel son tenues?

Esto puede deberse a baja concentración de muestras, desajuste entre la luz y la tinta, filtro inadecuado, exposición incorrecta, luces antiguas o alta luz de fondo. Se debe verificar todo el sistema óptico antes de repetir el experimento.

Q4. Cuantos más megapíxeles tenga una cámara, mejor es la imagen, ¿verdad?

En absoluto, hay varios otros factores como la sensibilidad, el ruido, el rango dinámico, la calidad de los objetivos/filtros utilizados y la uniformidad de la iluminación. Revisa fotos reales en lugar de megapíxeles.

Q5. ¿Cuál es la frecuencia recomendada para las comprobaciones de imagen de un sistema de imagen?

Las comprobaciones rutinarias deben incluir la limpieza de la superficie de imagen, uniformidad de la iluminación, enfoque, filtros, enclavamientos de seguridad y consistencia de la imagen.