Por qué el control de calidad del producto CAR-T debe utilizar un carroñero de ácidos nucleicos

Una salvaguarda fundamental en la fabricación avanzada de terapias celulares

Uno de los principales avances en el tratamiento del cáncer ha sido la introducción de la terapia con células T del Receptor de Antígenos Quiméricos (CAR-T). Como otros "fármacos vivos", la calidad y seguridad de los productos CAR-T requieren pruebas intensivas. Sin embargo, de las muchas amenazas a las que son vulnerables las instalaciones de producción de CAR-T, algunas pasan desapercibidas, y una de las más críticas es la contaminación por ácidos nucleicos ambientales. Este artículo analiza las razones detrás de la necesidad del Nucleic Acid Scavenger para el control de calidad de productos CAR-T.

[Identificación y análisis de la agregación de microplásticos en células CAR-T - ScienceDirect]

La amenaza invisible: contaminantes medioambientales en la fabricación de CAR-T

La producción de células CAR-T es un proceso complejo de varios pasos que incluye la recogida de sangre del paciente, el aislamiento de células T, la transducción viral en las células T del paciente, la expansión de las células T del paciente y la formulación final de las células T. Durante cada uno de los pasos, que pueden llevar varias semanas completarse, el producto de células CAR-T es completamente vulnerable a contaminantes ambientales.

Aunque existen algunos requisitos regulatorios, estos se centran principalmente en algunos de los otros contaminantes biológicos:

•La FDA exige la prueba de productos de células CAR-T para detectar esterilidad, endotoxinas y micoplasma.

• El Número de Copia Vectorial (VCN) debe controlarse hasta un máximo de 1–5 copias por celda.

• Los requisitos de pureza especifican un cierto porcentaje de células CD3 que expresan CAR.

En comparación con estos otros requisitos de prueba, se presta mayor atención a la contaminación ambiental del ADN y ARN. Revelar sustancias ambientales dañinas como el ARN y el ADN deteriora la seguridad y la calidad del producto.

Estudio reciente: Microplásticos en productos CAR-T (2024)

Un estudio publicado en el Journal of Hazardous Material de Mahati S y colaboradores analiza que las terapias basadas en células CAR-T contienen cantidades problemáticas de microplásticos.

Este estudio también conduce a otras cosas, como:

1. Hasta ahora no se ha discutido sobre los microplásticos en relación con la fabricación de células CAR-T.

2. Los microplásticos causaron prácticamente ninguna actividad de células CAR-T según estudios de citometría de flujo, ELISA y citotoxicidad.

3. Los microplásticos causaban apoptosis, ferroptosis y agotamiento de las células T.

4. La vía de señalización del mTOR estaba hiperactivada.

La investigación expuso las siguientes consecuencias clínicas:

1. Las células CAR-T que estuvieron expuestas a microplásticos son menos capaces de identificar y destruir células cancerosas.

2. El agotamiento de las células T causado por los microplásticos reduce la resistencia subyacente de las células CAR-T en los pacientes.

Este nivel de contaminación por microplásticos podría hacer que el tratamiento sea ineficaz.

Esta línea de investigación se centró en el impacto de los microplásticos y el descubrimiento de contaminación de microplásticos y ácidos nucleicos ambientales en la fabricación son inseparables y se alojan en el mismo entorno discreto de fabricación y consumible.

Marco Regulatorio Internacional: Normas GMP para la Contaminación

El PIC/S y los reguladores mundiales han impuesto expectativas claras respecto a la contaminación en la fabricación de CAR-T.

Esto es lo que cita el análisis de 2026 en la literatura sobre gestión de la calidad:

• Los productos CAR-T no pueden ser esterilizados de forma terminal o con filtro. Por tanto, la prevención de la contaminación es la única línea de defensa que queda.

• Una estrategia de Control de Contaminación (CCS) debe incluir personal, equipos/componentes, el entorno de la instalación, materiales, el proceso y la detección/prevención.

• En el control de contaminación por ácidos nucleicos, consideraciones especiales incluyen:

• La capacidad de los programas de monitoreo ambiental para detectar residuos de ácidos nucleicos.

• Áreas de producción dedicadas para prevenir la contaminación cruzada de diferentes productos para pacientes.

• Los procedimientos de limpieza deben validarse para demostrar la eliminación de la contaminación por ADN/ARN.

• La brecha regulatoria: La normativa actual establece "desinfección" y "validación de limpieza", pero hay poco o ningún requisito para demostrar la eliminación de ácidos nucleicos. En consecuencia, los fabricantes siguen estando en riesgo de contaminación cruzada y de detección de ácidos nucleicos falsos positivos.

La contaminación ambiental por ácidos nucleicos afecta al control de calidad de CAR-T

El ADN ambiental y los fragmentos de ARN crean dos problemas principales:

1. Resultados incorrectos en las pruebas de control de calidad

El ADN plasmídico o vectores virales pueden permanecer en la superficie y contaminar las muestras de control de calidad. Dado que los ácidos nucleicos ambientales y los nucleicos de productos no pueden distinguirse en las pruebas de control de calidad, la qPCR y la NGS señalarán preocupaciones de seguridad, lo que provocará rechazos innecesarios de lotes de productos y retrasos en el tratamiento para los pacientes.

2. Contaminación cruzada entre productos

Los ácidos nucleicos del producto CAR-T de un paciente pueden permanecer en las superficies del equipo utilizado para la producción de CAR-T y ser transferidos al producto CAR-T de otro paciente. Dado que este es un riesgo para una terapia autóloga, es inaceptable.

3. Las pruebas de control de calidad de potencia se ven afectadas

La prueba de potencia de los productos CAR-T requiere medir el nivel de expresión de CAR y la actividad funcional de las células CAR-T. Los ácidos nucleicos presentes en el entorno pueden interferir con los ensayos de potencia que miden la actividad funcional de las células CAR-T mediante el proceso de transfección. Esto conduce a una evaluación inexacta de la potencia del producto que puede ser menor o superior al nivel real.

Introducción de Nucleic Acid Scavenger

Los agentes de limpieza tradicionalmente usados como el etanol o la lejía diluida no destruyen los ácidos nucleicos. La degradación química del ADN y ARN realizada por la tecnología Nucleic Acid Scavenger cubre esta carencia.

1. Mecanismo de acción

• Descompone el >99% del ARN/ADN unido a la superficie mediante hidrólisis química rápida

• Los componentes no interactuarán con membranas de sílice ni perlas magnéticas utilizadas en la extracción de ácidos nucleicos

• No afectará negativamente la eficiencia de extracción ni la calidad de los ácidos nucleicos aislados

• Valida la autenticidad y fiabilidad de los resultados de la detección posterior de ácidos nucleicos virales

2. Beneficios para la fabricación de CAR-T

• Versátil: Puede aplicarse a bancadas experimentales, armarios de bioseguridad, plástico, espuma e incluso envases en caja y cartón

• Conveniente: No es necesario alterar la concentración, aplicar una capa uniforme en la superficie

• Seguro: No hay medidas de protección especiales, los guantes estándar, la mascarilla y las gafas son suficientes

• Simple: No se requieren medidas especiales de control de almacenamiento y manipulación

Longlight Technology: tu socio fiable en la fabricación de terapias celulares

Longlight Technology es un proveedor de confianza de soluciones biotecnológicas y de laboratorio, fundada en 2015 por un equipo de profesores universitarios y profesionales técnicos con amplia experiencia en los mercados biotecnológicos.

Experiencia empresarial:

• Primero en lanzar el sistema chino de muestras por ultrasonicación enfocada y el primer sistema mundial de desgasificación por vacío de fluidos

• Centrarse en el diagnóstico molecular y la biología molecular desde nuestra fundación

• Aparatos de laboratorio biológico de investigación y diseño de clase mundial

Cartera relevante de productos de CAR-T QC:

• Scavenger de Ácidos Nucleicos (500mL, 1L, 2L y 5L disponibles)

• Geles de agarosa prefabricados, tubos de qubits, kits de extracción de ácidos nucleicos y preparación de bibliotecas

• Separadores magnéticos de purificación de ácidos nucleicos, diseño de campo uniforme

Calidad y fiabilidad:

• Estabilidad de 1 año en almacenamiento a temperatura ambiente

• Validado para su uso en bancos de trabajo, películas de plástico, cartones y cajas de espuma

• Solo para investigación y uso experimental. No para diagnóstico clínico

• Presencia global: Longlight participó en Medlab Asia & Asia Health 2024 en Bangkok, Tailandia, para servir a la comunidad biomédica global.

Integración de Scavengers de Ácidos Nucleicos en la Fabricación de CAR-T

Qué esperar en los sitios de producción de CAR-T:

1. Descontaminación diaria:

• Cada superficie en los armarios de bioseguridad antes y después de cada operación

• Superficies del equipo (centrífuga, incubadoras, separadores magnéticos, etc.)

• Contenedores de transporte para productos intermedios y finales

2.In el caso de realizar múltiples operaciones, la descontaminación es necesaria para:

• Manipular superficies para equipos que contactan con diferentes productos de pacientes

• Superficies de equipos de almacenamiento (frigoríficos, congeladores, contenedores marítimos, etc.)

3. Laboratorio de control de calidad:

• Superficies donde se prepara para PCR y secuenciación

• Descontaminación en el área de trabajo de extracción de ácidos nucleicos

4. Validación:

• Antes y después de aplicar el Escovedor de Ácidos Nucleicos, realizar muestras superficiales

• La eliminación del >99% de ácidos nucleicos debe ser confirmada mediante qPCR

• Los resultados deben estar listos para las próximas inspecciones

Conclusión: Fundamento de la Producción Moderna de Terapia Celular

El rápido desarrollo de las terapias CAR-T ha dado lugar a 12 terapias aprobadas globalmente para 2024. A medida que las terapias basadas en pacientes evolucionan hacia tratamientos comerciales, las preocupaciones sobre la contaminación serán más evidentes.

Esto será más justificable debido a:

• Los ácidos nucleicos presentes en el medio ambiente representan una amenaza para la seguridad y calidad del producto final

• Los organismos reguladores están aumentando los estándares para el control de la contaminación

• El estudio de 2024 de Mahati et al. sobre microplásticos destaca cómo los contaminantes ambientales comprometen la función de CAR-T

• Nucleic Acid Scavenger ofrece una solución validada y fácil de usar para este riesgo específico

Para los fabricantes de CAR-T, implementar Nucleic Acid Scavenger en estrategias de control de contaminación representa una inversión proactiva en la calidad del producto, el cumplimiento normativo y, en última instancia, los resultados para los pacientes. A medida que la industria avanza hacia terapias celulares editadas genéticamente más complejas, el principio fundamental permanece inalterado: un entorno de fabricación limpio produce terapias seguras y eficaces.

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Preguntas frecuentes

P1. ¿Es seguro Nucleic Acid Scavenger para superficies de vidrio de los armarios de bioseguridad?

Por supuesto. Es seguro para vidrio, acero inoxidable, plástico y superficies recubiertas. Solo una ligera rociada y dejarla secar al aire.

P2. ¿Qué efecto tendrá el residuo sobre la viabilidad de las células CAR-T?

Literalmente no hay ningún impacto. El reactivo no es citotóxico y no inhibe el crecimiento del cultivo celular.

P3. Entonces, ¿elimina la necesidad de eliminar el etanol y la lejía de nuestras prácticas diarias?

No. Solo debe usarse para la eliminación de ácidos nucleicos y no en sustitución de desinfectantes para bacterias y virus.

P4. ¿Con qué frecuencia debería usarlo en una instalación CAR-T GMP?

Antes y después de cada lote en superficies de trabajo, además de entre los lotes de pacientes en equipos compartidos.

P5. ¿Necesito limpiarme después de rociar?

No es obligatorio. Permitir que la solución se seque al aire maximiza la degradación. El limpieza puede propagar ácidos nucleicos no degradados.